對動態(tài)范圍進(jìn)行量化需要一個運算公式,即動態(tài)范圍值 = 20 log (well depth/read noise),其中Well depth代表是滿井電子,是CCD飽和時能接受的電子信號總值,read noise是讀出噪聲(以電子數(shù)來表示),每個CCD在讀數(shù)的過程中都會產(chǎn)生噪聲,噪聲越小,監(jiān)測靈敏度越高。其中滿井電子與CCD的bit值是相關(guān)的,通常下,bit值越高,滿井電子的數(shù)值越大。
舉例如下:
Well depth = 85,000 個電子, read noise = 12 個電子
Dynamic range = 20 log (85,000/12), or 77dB.
動態(tài)范圍的值越高CCD性能越好.
(3)、量子效率
CCD的量子效率也稱像素靈敏度,指在一定的曝光量下,像素勢阱中所積累的電荷數(shù)與入射到像素表面上的光子數(shù)之比。不同結(jié)構(gòu)的CCD其量子效率差異很大。比如100光子中積累到像素勢阱中的電荷數(shù)是50個,則量子效率為50%(100 photons = 50 electrons means 50% efficiency)。值得注意的是CCD 的量子效率與入射光的波長有關(guān)。
(4)、信噪比
說到信噪比就不得不提到暗電流了,
暗電流是導(dǎo)致CCD噪音的很重要的因素。暗電流指在沒有曝光的情況下,在一定的時間內(nèi),CCD傳感器中像素產(chǎn)生的電荷。我們在做化學(xué)發(fā)光檢測的時候,需要的曝光的時候比較長,這樣導(dǎo)致CCD產(chǎn)生較多的暗電流,對圖像的質(zhì)量影響非常大。通常情況下通過降低CCD的溫度來較為大限度的減少暗電流對成像的
影響。CCD產(chǎn)生的暗電流隨著溫度下降而減少,但是在-23℃下開始趨于平緩,由此可以得出溫度并非需要無休止的降低的。所以在選擇冷CCD時,溫度在-25℃(溫度,非室溫以下)下一般就可以達(dá)到您的要求了。
有的CCD是在圖像較為終生成后,通過軟件去背景來扣除暗電流,對于信號遠(yuǎn)遠(yuǎn)強于背景的有一定效果,但是對于弱信號處理過程中會產(chǎn)生越來越多的錯誤。
(5)、光學(xué)鏡頭
光學(xué)鏡頭是機器視覺系統(tǒng)中*的部件,直接影響成像質(zhì)量的優(yōu)劣,影響算法的實現(xiàn)和效果。光學(xué)鏡頭規(guī)格繁多,有時不免頭暈。光學(xué)鏡頭從焦距上可分為短焦鏡頭、中焦鏡頭,長焦鏡頭;從視場大小分有廣角、標(biāo)準(zhǔn),遠(yuǎn)攝鏡頭;結(jié)構(gòu)上分有固定光圈定焦鏡頭,手動光圈定焦鏡頭,自動光圈定焦鏡頭,手動變焦鏡頭、自動變焦鏡頭,自動光圈電動變焦鏡頭,電動三可變(光圈、焦距、聚焦均可變)鏡頭等。
(6)濾光鏡片
熒光:EB 、TLC plates、GFP plates、SYBR Green、SYBR Gold、SYBR Safe、SYPRO Red、SYPRO Orange、Texas Red、Rhodamine Red、Fluorescein、Deep Purple、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、熒光板等
(要根據(jù)具體的激發(fā)光源和濾鏡來決定)
| 激發(fā)波長 | 吸收波長 | 染料 |
Blue | 475nm | 537nm | SYBR Green、SYBR Gold、SYBR Safe、SYPRO Orange、Cy2等 |
Green | 534nm | 606nm | SYPRO Red、Cy3等 |
Red | 632nm | 609nm | Texas Red、Rhodamine Red 、Cy5等 |
凝膠成像系統(tǒng)特點:
暗箱模具成型,小巧美觀、抗干擾、密封性好!
專業(yè)化凝膠圖像分析軟件,全中文操作界面,自動識別8 bit、10bit、12 bit、16 bit圖像,友好的人機界面,操作簡便,功能強大,可對凝膠圖像進(jìn)行采集、編輯、分析及管理
日本原裝高分辨率變焦光學(xué)鏡頭
安全實用的凝膠切割工作裝置
全電腦控制所有操作過程,高度程序化(電腦控制暗箱/紫外及白光/光圈/變焦/焦距)
定時關(guān)機:用戶可自行設(shè)定定時關(guān)閉紫外光源的時間
拍攝范圍:較為大成像面積21cm×26cm
光源:多個輔助光源包括紫外透照,白光透照,紫外反射,白光反射等
主要功能:
1.凝膠圖像剪輯處理,標(biāo)記;
2.自動尋找凝膠條帶;
3.與公用的標(biāo)準(zhǔn)條帶或自選的標(biāo)準(zhǔn)條帶比較;
4.條帶(泳道)遷移路徑的校正;
5.核酸、蛋白的處理,計算相應(yīng)的分子量等數(shù)值;
6.詳細(xì)的分析結(jié)果可輸出成EXCEL格式,根據(jù)需要編輯。
適用范圍:
從整體總的來說凝膠成像(系統(tǒng))可應(yīng)用于:蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析
?。?)分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計要準(zhǔn)確很多。
?。?)密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
(3)密度掃描
在分子生物學(xué)和生物工程研究中,我們較為常用到的是對蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法就是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結(jié)合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴(kuò)增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分?jǐn)?shù)。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進(jìn)行相對密度定量并計算其占總和的百分?jǐn)?shù),密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
凝膠成像的分類:
(1)普通凝膠成像分析系統(tǒng):可以對蛋白電泳凝膠,DNA凝膠樣品進(jìn)行圖象采集并進(jìn)行定性和定量分析,樣品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、Radiant Red等染色的核酸監(jiān)測;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種染色的蛋白質(zhì)凝膠如考染等。(或UV,EB和有色及可見樣品成像);
?。?)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學(xué)發(fā)光、紫外-熒光、有色及可見樣品成像;
?。?)多色熒光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學(xué)發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像;
?。?)多功能活體成像分析系統(tǒng):UV,EB,化學(xué)發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像和離體組織和小型動物,及大型型動物。
較為后是品牌推薦:
進(jìn)口品牌美國的市場上見的是相對比較多的有:UVP、伯樂、alpha、SIM、KODAK、GE、Wealtec等;德國品牌主要有:Royal、Raytest等;英國品牌:UVI、Fedbio等;以色列DNR;荷蘭Isogen等等。目前這些國內(nèi)進(jìn)口品牌和國產(chǎn)品牌的差不多,但是價格肯定是高于國產(chǎn)品牌。
中國本土企業(yè)也掌握了凝膠成像核心技術(shù),性能方面不比進(jìn)口差,價格又比進(jìn)口的低,本土的品牌大致上可見:北京六一、君意東方、上海領(lǐng)成、上海培清、上海山富、上海復(fù)日、上海嘉鵬、上海勤翔、江蘇捷達(dá)等品牌。
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