PCR(Polymerase Chain Reaction),是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點。通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。 經典的PCR擴增反應分為三步:
1、高溫變性:模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2、低溫退火:模板DNA與引物的復性,模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
3、適溫延伸:DNA模板--引物結合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸為反應原料,靶序列為模板,按堿基互補配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。
影響擴增的因素:
1、由于各種原因,造成的PCR擴增體系中出現(xiàn)了非目的檢測樣本本身的模板,使得PCR結果出現(xiàn)假陽性
2、操作錯誤或者誤差造成的模板間交叉污染
3、PCR試劑的污染
4、PCR實驗器材的污染
5、PCR擴增產物的氣溶膠污染
防止污染的首要原則是要設置NTC(No Template Contro|)對照,一個不含有模板DNA但含有PCR體系中所有其他成分的對照。如果不能在污染的第一時間發(fā)現(xiàn),會導致后續(xù)一系列的數(shù)據(jù)無法使用。準備PCR體系的移液器要,千萬不能用吸取過PCR產物的移液器去準備PCR體系。
技術參數(shù)及配置要求 | 1 工作環(huán)境 1.1 工作溫度 15-31℃ 1.2 工作和存儲濕度 20-80% 1.3 工作電源 100–240 VAC (±10%), 50–60HZ. 2 用途 用于體外核酸片段擴增,具有溫度梯度功能。 3 性能與技術要求(*為必須滿足的指標) 3.1 主要性能 3.1.1 有5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏,實驗過程中實時顯示溫控及運行狀態(tài) 3.1.2 用戶可設置休眠模式使其更節(jié)電 3.2 主要技術指標(*為必須滿足的指標) * 3.2.1 標準反應模板:96-well 0.2 ml 反應板或96個0.2ml PCR管 *3.2.2 最大升降溫速率:4℃/秒 * 3.2.3 溫度梯度:同時運行8個不同溫度;溫度梯度范圍:30 - 100℃;溫差范圍:1 - 25℃ *3.2.4 溫度范圍:4-100℃ *3.2.5 5.7"高分辨率超大彩色液晶顯示屏,文字及溫度曲線全信息動態(tài)顯示,保證實時控制實驗過程 3.2.6 可存儲500個用戶程序 3.2.7 接口:1個USB |